VALIDAÇÃO DO KIT QUICKprep® (FASTinov®) PARA IDENTIFICAÇÃO RÁPIDA DE MICRORGANISMOS DIRETAMENTE EM AMOSTRAS DE URINA

1º Autor: Mariana de Sousa Pinheiro

UTAD, Vila Real; FMUP/Porto; RISE-Health

Coautores: Martins-Oliveira, I. (FASTinov, SA Porto); Abreu D. (FASTinov, SA Porto); Gomes R. (FASTinov, SA Porto); Silva-Dias A. (FASTinov, SA Porto); Passos-Carneiro F. (UNILABS, Porto); Poeta, P. (Microbiology and Antibiotic Resistance Team (MicroART), UTAD, Vila Real; Veterinary and Animal Research Centre (CECAV), UTAD, Vila Real; Associate Laboratory for Animal and Veterinary Sciences (AL4AnimalS), Portugal); Pina-Vaz C. (FASTinov, SA Porto; FMUP, Porto; RISE-Health); Soares, A.J. (RISE-Health; FMUP, Porto)

Resumo

As infeções do trato urinário são das infeções mais prevalentes quer no ambulatório quer no hospital. Escherichia coli é o microrganismo mais frequentemente isolado (75-90%) seguida de outros bacilos de Gram-negativo. Atualmente o diagnostico baseia-se, na cultura seguida de identificação (ID) e teste de suscetibilidade antimicrobiana (TSA) com tempo de resposta de cerca de 48h. Terapêutica empírica, que pode falhar ou até ser de maior espectro do que necessário, tem de ser instituída com impacto na morbi-mortalidade e inevitavelmente no aumento e propagação da resistência aos antimicrobianos (AMR).
O objetivo deste estudo foi a validação do QUICKprep® (FASTinov®) para identificação rápida e direta de microrganismos a partir de urina utilizando tecnologia MALDI-Tof. Trata-se de um kit que concentra os microrganismos mantendo a sua viabilidade, eliminando células humanas e detritos em menos de 5 min.
Um total de 321 amostras (166 inoculadas com estirpes bacterianas e leveduras pertencentes a uma coleção e 155 amostras clínicas da UNILABS, Porto) foram analisadas como positivas no Sysmex UF 5000 (>40000/ul). Foram excluídas amostras negativas ou apesentando possível contaminação. Todas foram semeadas e analisadas pelo método cultural de rotina e identificadas no MALDI-tof após 24 h. Em paralelo foi efetuado o kit QUICKprep após centrifugação de cerca de 5-8 ml a 4000 rpm, 10 min; o pellet foi ressuspendido em 1 ml de água estéril e transferido para tubo A do kit (contendo agente hemolítico) e centrifugado, 1 min a 13000 rpm; após rejeição do sobrenadante o pellet foi ressuspendido em 500 ul de água estéril e transferido para tubo B (agente de separação de células por gradiente) e de novo centrifugado, 1 min a 13000 rpm. Procedeu-se ainda a uma lavagem com 500 ul de água estéril, 1 min a 13000 rpm e rejeitado o sobrenadante. O pellet resultante foi colocado em duplicado na placa de MALDI-tof (Bruker) e identificado seguindo as recomendações do equipamento no modo Septityper. A ID obtida em minutos foi comparada com a obtida utilizando MALDI-tof a partir da colónia isolada. O tempo de resposta foi também comparado.
Nas urinas inoculadas, 100% das identificações obtidas foram concordantes com a subcultura. No que diz respeito às amostras clínicas, o MALDI-TOF não forneceu ID em 13 amostras (11%) que foram identificadas pelo método de referência como E. coli (n=11) e K. pneumoniae (n=2) pelo método de rotina. Em 5 amostras obtivemos ID de mais do que um microrganismo tendo o método convencional classificado como amostras contaminadas. Em nenhum caso se verificou uma falsa identificação.
O QUICKprep® permitiu uma correta identificação em cerca de 15 minutos, ao invés das 24 horas do método de rotina. Apesar da ID não ser suficiente, a sua informação rápida possui grande valor clínico. Este método tem ainda a vantagem do pellet resultante poder ser utilizada para a realização de qualquer TSA o que vai acelerar o processo de diagnóstico microbiológico e início de terapia correta e dirigida.